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細胞學堂 | 實驗室污染應(yīng)對攻略

更新時間:2024-03-15  |  點擊率:2034


在養(yǎng)細胞的過程中,實驗室污染仍是普遍存在的問題。在這個過程中,使用的試劑、耗材、環(huán)境、操作等都有可能造成污染,如支原體污染、細菌污染等[1]。污染會影響細胞的生長和形態(tài),甚至導致細胞功能、性質(zhì)發(fā)生改變,進而影響實驗研究的準確性。




因此,對實驗室污染進行預防、排查與清除,是至關(guān)重要的。本期細胞學堂為您整理了一份實驗室污染最-全應(yīng)對攻略,幫助您快速上手清除污染。


01


污染的預防

嚴格執(zhí)行細胞實驗室規(guī)章制度

不斷完善無菌實驗室規(guī)章制度,加強無菌實驗室的管理。外來進修人員、實習學生進入實驗室前要進行培訓和教育,掌握一定的基本理論、實驗技能、操作規(guī)程后,在帶教老師的指導下方可進行實驗操作。

培養(yǎng)箱、無菌室、凈化臺定期消毒

工作臺實驗前紫外燈消毒30 min,實驗后用75%的酒精擦拭臺面;實驗廢棄物高壓蒸汽滅菌后,丟棄至醫(yī)療廢物桶;無菌室以10 mL/m2的甲醛(40%),5 g/m2濃度的高錳酸鉀定期封閉消毒[2,3],若采用甲醛熏蒸,甲醛氣體必須分布到房間的每個角落。也可以使用普諾賽細胞房安全衛(wèi)士、水浴鍋安全衛(wèi)士進行定期清理。

杜絕感染源的產(chǎn)生

實驗人員進入實驗室必須穿隔離衣,盡量減少頻繁出入細胞實驗室,在操作過程中動作輕柔,避免微生物氣溶膠的產(chǎn)生。一旦發(fā)現(xiàn)污染,應(yīng)立即排查原因,采取有效可靠的方法清除污染源,盡可能的防止大面積污染。

控制實驗室濕度與溫度

細菌、真菌等廣泛存在于自然界中,屬于條件致病菌,有很強的繁殖能力,溫暖潮濕的環(huán)境,會大量滋生。因此,必須控制實驗室的溫度和濕度,保持室內(nèi)干燥與清潔,阻止細菌、真菌等繁殖,切斷其傳播途徑。




02


污染的排查 

實驗室常見污染有細菌、真菌、支原體、黑膠蟲等。在不確定是否污染的情況下,可進行排查,初步確定是否污染及污染的類型。

1

采樣

對懷疑污染的地方,比如操作臺、培養(yǎng)箱、顯微鏡等,用醫(yī)用滅菌級棉簽蘸取采樣液(生理鹽水)進行采樣;對可疑培養(yǎng)試劑,吸取少量試劑進行取樣;對懷疑有污染的細胞,吸取培養(yǎng)液上清進行取樣。

2

培養(yǎng)

將采集的樣本分別置于瓊脂培養(yǎng)基DMEM培養(yǎng)基中,瓊脂培養(yǎng)基放于生化培養(yǎng)箱培養(yǎng)48 h,DMEM培養(yǎng)基置于37℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7 d。

3

檢測

觀察瓊脂培養(yǎng)基是否出現(xiàn)細菌或者真菌菌落;可選擇使用PCR法、顯色法熒光染色法檢測是否有支原體污染;對于“黑膠蟲"污染,目前沒有明確鑒定方法。




03


污染后處理

環(huán)境中發(fā)現(xiàn)污染

使用75%的酒精擦拭操作臺/儀器設(shè)備,進行消毒。甲醛(40%)10 mL/m2高錳酸鉀5 g/m2,熏蒸細胞培養(yǎng)室。同時也可使用普諾賽細胞房安全衛(wèi)士、水浴鍋安全衛(wèi)士進行殺菌消毒。

細胞中發(fā)現(xiàn)污染

輕度細菌污染可用10×雙抗清洗處理,重度細菌污染建議丟棄后消殺。

真菌污染可以嘗試使用兩性霉素B進行處理,抑制真菌生長。真菌較難根-除,不建議保留,建議丟棄后消殺。

支原體、“黑膠蟲"污染后若細胞狀態(tài)尚可,可添加支原體清除試劑/“黑膠蟲"清除試劑培養(yǎng)2~3代觀察細胞狀態(tài);若細胞污染后狀態(tài)很差,建議丟棄后消殺。





參考文獻

1]

鐘偉月.廣西某高校細胞培養(yǎng)實驗室污染狀況的調(diào)查研究[J].廣西醫(yī)科大學學報,2022,39(9)1469-1473.

2]

邱小華.細胞實驗室污染原因及有效預防控制措施的分析[J].實驗與檢驗醫(yī)學,2015,33(3)364-365.

3]

費飛,趙越,王曉博.一起霉菌引起實驗室污染的調(diào)查[J].醫(yī)學動物防制,2006,22(11)811-812.




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